Uji Senyawa Antioksidan dengan Metode Difenilpikril hidrazil

Antioksidan merupakan zat yang mampu memperlambat atau mencegah terjadinya proses oksidasi¹. Dalam konsentrasi yang rendah, zat ini dapat memperlambat dan mencegah terjadinya proses oksidasi yang menyebabkan terbentuknya radikal bebas dan berakibat terjadinya kerusakan protein dan asam nukleat dan memicu berbagai jenis penyakit seperti kanker dan penuaan dini.

Yang termasuk senyawa antioksidan adalah alkaloid, fenolik, polifenol, vitamin E, vitamin C, β-Karoten, EGCG, dan sebagainya. Selain itu, juga terdapat enzim yang memiliki kemampuan sebagai antioksidan seperti Superoksida Dimustase (SOD), katalase, ataupun glutation dismustase. Senyawa-senyawa ini terkandung dalam makanan dan minuman, suplemen makanan atau farmasi, ataupun kosmetik.

Dalam laboratorium uji, untuk melakukan assay atau uji aktivitas antioksidan, dikenal metode DPPH (Difenilpikril hidrazil). Zat ini berperan sebagai electron scavenger (penangkap elektron) atau hydrogen radical scavenger (penangkap radikal hidrogen bebas). Hasilnya adalah molekul yang bersifat dimagnetik dan stabil². Jika suatu senyawa antioksidan direaksikan dengan zat ini maka senyawa antioksidan tersebut akan menetralkan radikal bebas dari DPPH. Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan dengan inkubasi DPPH dengan ekstrak antioksidan selama 30 menit sehingga menghasilkan larutan yang berwarna kuning kemudian dilakukan pengukuran panjang gelombang pada 517 nm. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut³:

(DPPH^•) + (H—A) → DPPH—H + (A^•)
Ungu                         Kuning

H-A adalah senyawa antioksidan yang akan diuji.

                                                                           

Aktivitas antioksidan diperoleh dari nilai absorbansi yang selanjutnya akan digunakan untuk menghitung persentase inhibisi 50% (IC50) yang menyatakan konsentrasi senyawa antioksidan yang menyebabkan 50% dari DPPH kehilangan karakter radikal bebasnya. Semakin tinggi kadar senyawa antioksidan dalam sampel maka akan semakin rendah nilai IC50.

Merck Biosciences memproduksi DPPH yang digunakan dalam uji aktivitas senyawa antioksidan dengan bentuk padatan berwarna hitam (pelarutan dengan DMF atau etanol akan menghasilkan warna ungu kehitaman), memiliki kemurnian ≥ 90% dan larut dalam DMF atau etanol. Tersedia dengan kemasan 50 mg (300267-50MG) dengan brand Calbiochem^®.